做血清实验的过程中常常会遇到各种各样的问题，用什么样的方法可以把这些遇到的问题一一化解呢？现在biopike就总结出来了血清实验中常见问题的解决办法，希望能对你接下来的实验起到帮助的作用。接下来就Get血清实验新技能吧！！

1. 保存血清最好的方法？

我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2. 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

3. 如何解冻血清才不会使产品质量受损？

我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。

解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。请勿将血清置于37℃太久。

若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

4. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理？

沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。

血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。

若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g，1-2分钟稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。

大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

5. 如何避免沉淀？

按如下操作可避免沉淀的产生：

(1) 解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

(2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

(4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。

(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

(6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

6. 为什么要热灭活血清？

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

7. 有必要做热灭活吗？

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。

而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量！

8. 细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？

一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，

首先，要肉眼观察培养基是否混浊，

然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。

如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：

(1) 细胞生长过老，破碎的细胞残骸；

(2) 血清质量不好，反复冻融的结果；

(3) 配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；

(4) 配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；

(5) 培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

9. 细胞培养中如何防止黑点？

(1) 尽可能地减少血清冻融次数。

(2) 培养基无需37℃水浴。

(3) 培养基保持最佳PH值7.0-7.2。

(4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。

(5) 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。

10. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？

胎牛血清没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊，这应该不会影响血清的质量。推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。

11. 如何避免沉淀物的产生？

我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作：解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。

血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

12. 细胞复苏

经过以下几个步骤，细胞即可生长传代：

(1) 准备一个1000ml的烧杯，放入大概三分之二杯37℃温水。

(2) 从液氮中取出冻存管，迅速放入温水中震荡，尽可能在短时间内使其中的物质融化。

(3) 将冻存管中的细胞悬液转移到离心管中，然后再1000转/分钟离心10分钟，弃去上清液。

(4) 在细胞培养瓶中加入培养液，然后把细胞放入培养瓶中，放入37℃温箱中培养。

13. 鼠尾胶原(collegen)制备

鼠尾胶原是常用的包被培养皿的基质。

(1) 75%酒精浸泡大鼠尾巴30min；

(2) 将尾巴剪开、去掉皮毛，并剪成小段，抽出银色的尾键；

(3) 把剪碎的尾键置于150ml、0.1%消过毒的醋酸中，4℃放置，并不时振荡；

(4) 48h后取上清，4000转/分钟离心30min后，取上清；分装上清(鼠尾胶)4℃保存。

有时可继续向步骤(4)沉淀中加入10-20ml醋酸，重复以上步骤，以制备更多的鼠尾胶。

由于胶原液不能过滤，也不能高压灭菌，所以制取胶原的过程当中需要无菌操作。在使用时待凝胶后，放在紫外线下照射过夜，第二天即可使用。

14. 多聚赖氨酸的配制

(1) 配制硼酸缓冲液(pH8.4)

A液：硼砂溶液--1.907g溶于100ml三蒸水(0.05M)

B液：硼酸溶液--1.237g溶于100ml三蒸水(0.05M)

4.5ml A液 + 5.5ml B液 = 硼酸缓冲液(pH8.4)

(2) 多聚赖氨酸5mg溶于50ml硼酸缓冲液中，配成100ug/ml的多聚赖氨酸溶液。过滤、除菌，-20℃保存。

(3) 使用时4倍稀释，可以重复使用3次。